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非預(yù)染蛋白Marker在電泳過(guò)程中看不到，電泳結(jié)束后經(jīng)過(guò)蛋白染色后才能起指示作用，無(wú)法在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中起預(yù)示作用。

但是由于蛋白沒有附帶染料分子或者是標(biāo)記分子，所示大小正好是蛋白原本的大小，所以最準(zhǔn)確。你的Western Blot條帶總對(duì)不齊？可能是第一步就選錯(cuò)了蛋白Marker！

蛋白Marker主要分為未預(yù)染蛋白Marker和預(yù)染蛋白Marker兩種，另外還有一些其他類型的蛋白Marker：如顯影蛋白Marker等。

未預(yù)染蛋白Marker

非預(yù)染蛋白Marker在電泳過(guò)程中看不到，電泳結(jié)束后經(jīng)過(guò)蛋白染色后才能起指示作用，無(wú)法在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中起預(yù)示作用。但是由于蛋白沒有附帶染料分子或者是標(biāo)記分子，所示大小正好是蛋白原本的大小，所以最準(zhǔn)確。

預(yù)染蛋白Marker

是純化好的幾種蛋白，通過(guò)與染料共價(jià)耦聯(lián)后混合在一起，在電泳過(guò)程中或者轉(zhuǎn)膜時(shí)可以直接觀察到的一種蛋白Marker。

預(yù)染蛋白Marker又可分為單色預(yù)染和多色預(yù)染。

Marker條帶越多參考價(jià)值越大，同時(shí)也越難區(qū)分，若用不同顏色則容易辨認(rèn)；單色的Marker通常利用其中某些條帶加倍濃度來(lái)提示其大小。

預(yù)染蛋白Marker在電泳過(guò)程可以起到預(yù)示作用，當(dāng)觀察目標(biāo)蛋白大小位置進(jìn)入最佳分辨區(qū)時(shí)，停止電泳，以得到最佳分辨效果。

轉(zhuǎn)膜過(guò)程可以監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)膜效率，同時(shí)可以在膜上標(biāo)記蛋白分子量。

但是，預(yù)染蛋白Marker與染料共價(jià)偶聯(lián)，在不同的緩沖條件下，電泳遷移特性可能會(huì)發(fā)生某些變化，導(dǎo)致一些偏差。

也就是說(shuō)，預(yù)染蛋白Marker條帶代表的是相對(duì)大小，而不是絕對(duì)大小。

顯影蛋白Marker
顯影蛋白Marker，蛋白條帶中含有IgG結(jié)合位點(diǎn)，IgG結(jié)合位點(diǎn)會(huì)結(jié)合用于檢測(cè)靶蛋白的一抗或二抗，使得蛋白Marker在印跡膜上可與目的條帶一同呈現(xiàn)。

通常會(huì)有兩個(gè)預(yù)染條帶，便于動(dòng)態(tài)觀察蛋白質(zhì)電泳狀態(tài)，判斷轉(zhuǎn)膜效果和方向；結(jié)合抗體后經(jīng)化學(xué)發(fā)光檢測(cè)可顯示多個(gè)條帶。